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PCR 产物纯化方法(酚/氯仿)

作者:admin 发布日期:2018-09-21 18:14
1. 取PCR 产物(此次为200 ul),加入50 ul 酚,加入50 ul 氯仿/异戊醇(分相上层应该是澄清的,如果不是澄
清,可以再次离心5 min,将澄清上清取出);
2. 剧烈振荡(100 bp 的小片断没有必要剧烈振荡),混匀后,离心6000-8000 转(一般大片断离心10000 rpm),
5 min。(只能离心5 min,过久的话就会酚变成沉淀);
3. 取上请,不要吸到中间箱,吸取后再在弃液中加入双蒸水,再次离心,收集上清,反复两次;
4. 上请2 倍体积的100%乙醇以及0.2 倍体积的NaAc 沉淀,-20oC(1 h 也可以)过夜沉淀(异丙醇效果更好,
但是不纯);
5. 12000 转,离心20min,弃去上请。70%乙醇清洗一次,离心,12000 rpm,10 min,重复洗涤1-2 次(多
洗几次除去酚杂质);
6. 弃去乙醇,充分晾干,双蒸水融解。
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