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反向 PCR(染色体步移)

作者:admin 发布日期:2018-09-21 18:09
反向PCR(Inverse PCR 或Reverse PCR)的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA,也就是说这一反应体
系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA。反向PCR 可用于研究与已知DNA 区段相连接的未知染色体序列,
因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA 区两末端序列互补,但两引物3’端是相
互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA 连接酶连接成一个环状DNA 分子,通过反向PCR
扩增引物的上游片段和下游片段;现已制备了酵母人工染色体(YAC)大的线状DNA 片段的杂交探针,这对于转座
子插入序列的确定和基因库染色体上DNA 片段序列的识别十分重要。
该方法的不足是:①需要从许多酶中选择限制酶,或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的
DNA 片段。这种选择不能在非酶切位点切断靶DNA。②大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列,而在YAC
或Cosmid 中的未知功能序列中有时也会有这些序列,这样,通过反向PCR 得到的探针就有可能与多个基因序列杂
交。
利用反向PCR 可对未知序列扩增后进行分析,探索邻接已知DNA 片段的序列,并可将仅知部分序列的全长
cDNA 进行分子克隆,建立全长的DNA 探针。适用于基因游走、转位因子和已知序列DNA 旁侧病毒整合位点分析
等研究。
Takara 有相关试剂盒(Genome Walking Kit)。
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